詳細介紹一下 FITC-海藻糖的熒光標記原理
2024-10-26
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FITC-海藻糖|FITC-Trehalose
FITC - 海藻糖的熒光標記原理主要基于熒光素異硫氰酸酯(FITC)與海藻糖的化學反應以及 FITC 的熒光特性,具體如下:
1.FITC 的結構與特性:
FITC 是一種有機熒光染料,其分子結構中含有異硫氰酸基團(-N=C=S),這個基團具有較高的化學反應活性。
在特定的條件下,FITC 能夠與含有氨基(-NH?)等活性基團的分子發生共價結合。并且 FITC 在受到特定波長的光激發后,能夠吸收能量并發射出特定波長的熒光,這是其能夠作為熒光標記物的重要基礎。
2.海藻糖的結構與可修飾位點:
海藻糖是一種由兩個葡萄糖分子以 1,1 - 糖苷鍵構成的非還原性糖。其分子結構相對穩定,但可以通過化學方法對其進行修飾。
通常需要先對海藻糖進行化學處理,在其分子上引入羧基(-COOH)等活性基團,使其能夠與 FITC 發生反應。比如可以使用丁二酸酐等試劑與海藻糖反應,將海藻糖上的羥基(-OH)轉化為羧基。
3.標記反應過程:
當經過處理后的帶有羧基的海藻糖與 FITC 混合時,FITC 的異硫氰酸基團會與海藻糖分子上的羧基發生親核加成反應,形成穩定的共價鍵,從而將 FITC 連接到海藻糖分子上。
經過反應后,得到的 FITC - 海藻糖復合物既保留了海藻糖的基本結構和性質,又具有了 FITC 的熒光特性。當用特定波長(如 493nm 左右)的光照射 FITC - 海藻糖時,它會吸收光子能量,電子從基態躍遷到激發態,隨后電子從激發態回到基態時會釋放出能量,發出波長約為 520nm 的綠色熒光。
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