Biotin sulfo-N-hydroxysuccinimide ester 是一種水溶性生物素化試劑，全稱 Sulfosuccinimidyl biotin（磺基琥珀酰亞胺基生物素），簡(jiǎn)稱 Sulfo-NHS-Biotin，核心功能是通過(guò)酰胺鍵高效標(biāo)記含游離氨基（-NH?）的生物分子，廣泛用于蛋白質(zhì)、抗體、多肽的生物素化修飾。
結(jié)構(gòu)特點(diǎn)分子由三部分組成：
生物素端：與鏈霉親和素 / 親和素具有超高親和力（Kd≈10?1? M），用于后續(xù)靶標(biāo)分子的捕獲、分離或檢測(cè)。
間隔臂：短碳鏈連接生物素與活性酯，降低空間位阻，保障偶聯(lián)效率。
磺基 - NHS 酯端：磺酸鹽基團(tuán)（-SO??） 賦予分子優(yōu)異水溶性，無(wú)需有機(jī)溶劑助溶；NHS 酯基團(tuán)可與伯氨基（如蛋白質(zhì)賴氨酸殘基的 ε-NH?）在溫和條件下反應(yīng)，生成穩(wěn)定酰胺鍵，同時(shí)釋放 N - 羥基琥珀酰亞胺（NHS）。
反應(yīng)條件
緩沖體系：優(yōu)選 PBS（pH 7.0-8.5） 或碳酸氫鈉緩沖液（pH 8.0-8.5），避免使用含氨基的緩沖液（如 Tris、甘氨酸），防止競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)。
反應(yīng)溫度：室溫或 4℃，反應(yīng)時(shí)間 30 min-2 h，具體取決于靶標(biāo)分子濃度。
終止反應(yīng)：加入過(guò)量甘氨酸（終濃度 50 mM）或 Tris 緩沖液，孵育 10-15 min 淬滅未反應(yīng)的 NHS 酯基團(tuán)。
水溶性優(yōu)異：磺基修飾解決了傳統(tǒng) NHS-Biotin（CAS 35013-72-0）水溶性差的問(wèn)題，可直接溶于水相反應(yīng)體系，避免使用 DMF、DMSO 等有機(jī)溶劑對(duì)生物分子活性的破壞。
反應(yīng)特異性高：僅與游離伯氨基高效偶聯(lián)，不與巰基、羧基等其他基團(tuán)反應(yīng)，標(biāo)記位點(diǎn)可控。
生物相容性好：標(biāo)記后不影響靶標(biāo)分子的生物活性，適用于活體、細(xì)胞及體外實(shí)驗(yàn)體系。
防潮處理：NHS 酯基團(tuán)對(duì)水敏感，易水解失效，試劑需在干燥環(huán)境下取用，開封后盡快使用。
pH 控制：反應(yīng)體系 pH 需嚴(yán)格控制在 7.0-8.5，pH 過(guò)低會(huì)降低 NHS 酯活性，pH 過(guò)高會(huì)加速 NHS 酯非特異性水解。
純化步驟：反應(yīng)后需通過(guò)透析、凝膠過(guò)濾層析（如 Sephadex G-25）去除游離生物素和副產(chǎn)物，避免干擾后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
投料比：根據(jù)靶標(biāo)分子的氨基數(shù)量調(diào)整試劑與底物的摩爾比（通常 1:5-1:20），過(guò)高投料比易導(dǎo)致過(guò)度標(biāo)記，影響分子活性。
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